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如何设置ELISA实验的阳性和阴性对照?

在ELISA实验中,设置阳性对照和阴性对照是确保实验准确性和可靠性的关键步骤。以下是如何设置这两种对照的方法:

阳性对照(Positive Control):
- 阳性对照是已知含有目标分析物的样本。它用于证明试剂盒的灵敏度和反应系统的有效性。通常使用浓度已知的纯化抗原或包含高水平目标分析物的临床样本作为阳性对照。

阴性对照(Negative Control):
- 阴性对照是不含目标分析物的样本。它用于确保实验中没有非特异性结合或污染。阴性对照通常使用未经处理的细胞培养基、纯化水或来自未感染个体的样本。

具体设置方法如下:

1. 准备对照样本:
- 从试剂盒中获取阳性对照样本,或者根据实验需要准备含有目标分析物的样本。
- 同时准备阴性对照样本,确保其不含有目标分析物。

2. 添加对照样本到ELISA板孔:
- 按照试剂盒说明书的要求,将阳性对照样本和阴性对照样本分别加入到指定的板孔中。
- 确保加样量准确无误。

3. 运行ELISA实验:
- 按照试剂盒的操作步骤进行抗体孵育、洗涤、底物添加等步骤。
- 在整个过程中,阳性对照和阴性对照应与待测样本同时处理。

4. 读数和数据分析:
- 使用酶标仪读取阳性对照和阴性对照的吸光度值(OD值)。
- 分析阳性对照的OD值应显著高于阴性对照,表明试剂盒工作正常。
- 对于待测样本,其OD值应介于阳性对照和阴性对照之间,以区分阳性和阴性结果。

通过设置阳性对照和阴性对照,可以有效监控ELISA实验的性能,并确保实验结果的准确性。在实验报告中,应详细记录对照样本的信息和结果,以供后续分析和验证。

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